DYCP - 31BN电泳仪点样失败？原因剖析与解决方案

作者：六一生物发布时间：2025-04-02 09:05:08 点击：

DYCP - 31BN电泳仪在核酸和蛋白质的分析实验中扮演着重要角色，点样作为实验的关键步骤，其成功与否直接关系到最终的电泳结果。然而，不少实验人员在使用DYCP - 31BN电泳仪时，会遭遇点样失败的问题。本文将深入剖析DYCP - 31BN电泳仪点样失败的原因，并提供切实可行的解决方案。

一、样品相关问题

样品状态不佳

1. 样品浓度异常：样品浓度过高或过低都可能导致点样失败。当样品浓度过高时，其黏度增大，难以从移液器中顺利排出，容易堵塞吸头，造成点样量不准确或无法点样。例如，在核酸电泳实验中，若PCR产物浓度超过500ng/μL，就可能出现此类问题。相反，样品浓度过低，会使样品在加样孔中扩散过快，难以形成清晰的条带，甚至无法检测到条带。使用分光光度计或其他定量工具，准确测量样品浓度，对于浓度过高的样品，用合适的缓冲液进行梯度稀释；对于浓度过低的样品，可采用浓缩方法，如超滤、沉淀等，提高样品浓度。
2. 样品存在杂质或沉淀：样品中若含有杂质、颗粒或沉淀，会阻碍样品的流动，导致点样失败。在蛋白质样品提取过程中，若未充分去除细胞碎片、多糖等杂质，这些杂质可能会堵塞移液器吸头，影响点样。对样品进行离心或过滤处理，去除杂质和沉淀。对于含有较多杂质的样品，可采用柱层析等方法进行纯化，确保样品纯净。

样品与缓冲液混合不当

1. 混合比例失调：样品与加样缓冲液的混合比例对样品的流动性和沉降性能有重要影响。若加样缓冲液过少，样品密度不够，难以沉入加样孔底部；若加样缓冲液过多，样品被过度稀释，同样会影响点样效果。一般情况下，样品与加样缓冲液按4:1或5:1的比例混合。在混合时，要充分振荡或吹打，确保两者均匀混合。
2. 混合后产生气泡：混合过程中产生的气泡会占据移液器吸头的空间，导致点样量不准确，甚至无法点样。在混合样品和加样缓冲液后，让混合液静置一段时间，使气泡自然逸出，也可通过低速离心去除气泡。

二、点样工具问题

移液器故障

1. 吸头适配不当：使用与移液器不匹配的吸头，容易导致密封不严，出现漏液或吸液不畅的问题，从而影响点样。在选择吸头时，要确保其与移液器的型号相符，安装时要将吸头紧密套在移液器上，避免松动。
2. 移液器校准不准确：移液器长期使用后，其准确性可能会下降，导致点样量偏差较大。定期对移液器进行校准，可使用电子天平或移液器校准器进行校准，确保其在不同量程下的吸液量准确无误。若移液器出现故障，如活塞磨损、弹簧失灵等，应及时维修或更换。

三、凝胶与电泳槽问题

凝胶制备缺陷

1. 加样孔损坏：在凝胶制备过程中，若加样孔受到损坏，如破裂、变形等，会影响样品的进入，导致点样失败。在倒胶前，检查模具是否完好，确保加样孔的形状和大小正常。若加样孔损坏，应重新制备凝胶。
2. 凝胶表面不平整：凝胶表面不平整，会使加样孔的深度不一致，导致点样时样品无法均匀分布在加样孔中。在制备凝胶时，要确保凝胶溶液充分混合，倒入模具后，避免震动，让凝胶自然凝固，形成平整的表面。

电泳槽准备不充分

1. 缓冲液液位异常：缓冲液液位过低，无法覆盖凝胶表面，会导致点样后样品无法正常迁移；缓冲液液位过高，可能会淹没加样孔，使样品扩散。在点样前，检查缓冲液的液位，确保其高于凝胶表面1 - 2cm。
2. 电泳槽污染：电泳槽内残留的杂质和污染物，可能会污染样品和凝胶，影响点样效果。在每次使用前，用去离子水冲洗电泳槽，去除残留的缓冲液和杂质。对于难以清洗的污渍，可使用实验室专用的清洁剂进行清洗，但要确保清洗后彻底冲洗干净，无清洁剂残留。

四、操作不当问题

点样手法不正确

1. 吸样和点样速度过快：吸样和点样速度过快，会导致样品在移液器吸头内形成湍流，产生气泡，影响点样准确性。在吸样和点样时，要缓慢平稳地操作移液器，避免速度过快。
2. 移液器吸头插入过深或过浅：移液器吸头插入加样孔过深，可能会刺破凝胶，导致样品泄漏；吸头插入过浅，样品无法完全进入加样孔。在点样时，将移液器吸头垂直缓慢插入加样孔底部，轻轻推动活塞，将样品缓慢注入加样孔中。

通过对DYCP - 31BN电泳仪点样失败原因的全面剖析，实验人员可以在遇到问题时迅速定位，采取有效的解决措施，确保点样成功，获得准确可靠的电泳结果。在实验过程中，要严格遵守操作规程，不断总结经验，提高实验技能。若你在点样过程中有任何经验或疑问，欢迎在评论区留言分享。

本文由北京六一生物编辑整理。

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