DYCZ - 20H型电泳仪上样后样品在孔内扩散怎么解决？

作者：六一生物发布时间：2025-03-05 09:16:13 点击：

在分子生物学实验进程中，DYCZ - 20H型电泳仪承担着分离和分析生物大分子的重任。然而，上样后样品在孔内扩散这一状况，却如同绊脚石，严重干扰实验的顺利推进。今天，我们就来全方位探究DYCZ - 20H型电泳仪这一问题的根源，并给出切实有效的解决策略。

一、样品在孔内扩散对实验的不良影响

样品在孔内扩散带来的后果是多方面且严重的。首先，它会导致实验结果的偏差。在DNA或蛋白质电泳实验中，清晰、独立的条带是准确判断生物大分子分子量、纯度等关键信息的基础。一旦样品在孔内扩散，原本应在特定泳道内迁移的分子会相互混合，条带变得模糊、扭曲，无法精确测定生物大分子的特性。例如，在基因分型实验中，样品扩散可能使不同基因型的条带相互重叠，导致分型错误，进而影响对遗传信息的准确解读。其次，样品扩散意味着部分样品无法按照预期的路径迁移，造成样品浪费。对于一些珍贵的样品，如稀有的细胞提取物或临床样本，这种浪费可能是难以承受的，因为重新获取相同的样品可能面临诸多困难。此外，频繁出现样品在孔内扩散的问题，会严重影响实验的重复性和可靠性，使科研人员对实验结果的信心大打折扣，阻碍科研项目的顺利开展。

二、样品在孔内扩散的原因及解决方法

1. 样品浓度过低

- 原因：当样品浓度过低时，其粘性不足，在加样孔内难以保持稳定。在缓冲液的浮力和表面张力作用下，样品容易扩散。例如，在提取DNA或蛋白质后，由于稀释过度，导致样品浓度低于正常范围，就容易出现这种情况。
- 解决方法：重新评估样品浓度。可以使用分光光度计或其他浓度测定仪器，准确测定样品浓度。若浓度过低，通过浓缩的方式提高样品浓度。对于DNA样品，可以采用乙醇沉淀等方法进行浓缩；对于蛋白质样品，可使用超滤离心管等工具进行浓缩。在浓缩过程中，要严格按照操作规程进行，避免样品损失。

2. 样品粘性不足

- 原因：样品中缺乏足够的粘性物质，如在制备DNA或蛋白质样品时，未添加适量的甘油、蔗糖等增粘剂，使得样品在加样孔内无法稳定存在。此外，样品中存在的某些物质可能会降低其粘性，例如高浓度的盐离子等。
- 解决方法：在样品中添加适量的增粘剂。一般来说，在DNA或蛋白质样品中添加5% - 10%的甘油或蔗糖溶液，可以有效增加样品的粘性，使其在加样孔内保持稳定。添加增粘剂后，要充分混匀样品，确保增粘剂均匀分布。

三、上样操作因素

1. 加样量过多

- 原因：加样量超过了加样孔的承载能力，样品在孔内过于拥挤，导致部分样品溢出并扩散。这可能是由于移液器使用不熟练，读数不准确，或者对加样孔的容量判断失误等原因造成的。例如，加样孔的最大容量为10μL，若误加入了15μL的样品，必然会出现样品在孔内扩散的情况。
- 解决方法：准确控制加样量。使用经过校准的移液器，并在每次使用前仔细检查移液器的量程和读数。在加样时，缓慢推动移液器活塞，将样品准确加入到加样孔中。可以先进行少量多次的加样练习，熟练掌握加样技巧，确保加样量准确无误。同时，要清楚了解加样孔的容量，避免加样过多。

2. 加样速度过快

- 原因：加样速度过快，样品会以较大的冲击力进入加样孔，将加样孔内的空气快速挤出，形成气泡，同时也容易导致样品在孔内扩散。特别是在使用微量移液器时，若按压活塞速度过猛，就容易出现这种情况。
- 解决方法：放慢加样速度。将移液器枪头垂直缓慢地插入加样孔底部，然后轻轻、匀速地推动活塞，使样品缓慢进入加样孔。在加样过程中，要注意观察加样孔内样品的上升情况，避免样品溢出和产生气泡。若发现有气泡产生，可将移液器枪头稍微提起，让气泡逸出后再继续加样。

四、电泳仪相关因素

1. 加样孔损坏

- 原因：加样孔在长期使用过程中，可能会受到外力撞击、化学腐蚀等，导致其形状变形、孔径变大或出现裂缝。损坏的加样孔无法有效容纳样品，从而导致样品在孔内扩散。例如，在清洗凝胶板时，如果不小心用硬物刮擦加样孔，就可能造成加样孔损坏。
- 解决方法：仔细检查加样孔的状态。若发现加样孔有损坏，对于轻微变形或裂缝较小的加样孔，可以尝试使用密封胶进行修补。但如果加样孔损坏严重，如孔径明显变大或出现较大裂缝，建议更换新的凝胶板。在日常使用中，要注意保护加样孔，避免受到外力损伤。
2. 缓冲液问题

- 原因：缓冲液的密度、粘度等性质与样品不匹配，可能导致样品在加样孔内扩散。例如，缓冲液的密度过低，无法有效支撑样品，使样品下沉并扩散；缓冲液的粘度过低，无法对样品形成足够的阻力，也会导致样品扩散。此外，缓冲液中存在杂质或微生物污染，可能会影响缓冲液的性质，进而影响样品在孔内的稳定性。
- 解决方法：检查缓冲液的质量和性质。确保缓冲液的配方正确，密度和粘度适中。可以通过测量缓冲液的密度和粘度，与标准值进行对比，若有偏差，及时调整缓冲液的配方。同时，要使用新鲜、无污染的缓冲液，避免缓冲液中存在杂质或微生物。在配制缓冲液时，要使用干净的试剂和去离子水，并确保实验器具的清洁。

五、预防样品在孔内扩散的措施

1. 规范样品制备流程：在样品制备过程中，严格按照操作规程进行，准确控制样品浓度，合理添加增粘剂，确保样品质量。对样品进行充分的离心、过滤等预处理，去除杂质，提高样品的稳定性。
2. 加强上样操作培训：对实验人员进行系统的移液器使用培训，提高加样操作的准确性和熟练度。强调加样过程中的注意事项，如控制加样量、放慢加样速度等。可以通过模拟实验和实际操作考核，确保实验人员掌握正确的加样技巧。
3. 定期检查和维护电泳仪：定期检查电泳仪的加样孔、凝胶板、缓冲液系统等部件，及时发现并处理损坏或老化的部件。在每次使用前，仔细检查电泳仪的各部分是否正常，确保实验的顺利进行。同时，要按照仪器的使用说明，定期对电泳仪进行清洁和维护，延长仪器的使用寿命。

DYCZ - 20H型电泳仪上样后样品在孔内扩散是一个需要认真对待的问题。通过深入分析原因，并采取有效的解决方法和预防措施，我们能够减少样品在孔内扩散的发生，保障实验结果的准确性，提高实验效率。如果您在实验过程中遇到类似问题，欢迎在评论区留言分享，我们一起探讨解决方案，共同推动实验的成功开展。

本文由北京六一生物编辑整理。

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