DYCZ - 24B双垂直电泳仪上样后样本丢失咋回事？

作者：六一生物发布时间：2025-02-11 09:30:14 点击：

在使用DYCZ - 24B双垂直电泳仪进行实验时，上样后样本丢失是一个让人十分困扰的问题。这不仅会浪费珍贵的样本，还可能导致实验失败，延误科研进度。接下来，我们将深入探讨DYCZ - 24B双垂直电泳仪这一现象背后的原因，并提供有效的解决方法。

一、样本处理与保存问题

1. 原因：样本在处理过程中，可能会因为与容器表面的相互作用而发生吸附。例如，使用普通的塑料离心管储存蛋白质样本时，蛋白质分子可能会吸附在离心管内壁，导致实际可用于上样的样本量减少。此外，样本中的某些成分在特定条件下可能会发生沉淀。比如，核酸样本在高盐浓度或低温环境下，核酸分子可能会形成沉淀，在上样时被遗漏。
2. 解决方法：对于样本吸附问题，可以选择经过特殊处理、具有低吸附特性的容器来储存和处理样本。同时，在转移样本时，用少量的缓冲液多次冲洗容器，确保样本尽可能完全转移。对于样本沉淀问题，在上样前，将样本进行适当的离心处理，使沉淀重新悬浮，然后轻轻混匀后再进行上样。同时，优化样本保存条件，避免样本在储存过程中发生沉淀。

二、样本降解

1. 原因：样本在保存和处理过程中，可能会受到各种因素的影响而发生降解。比如，在提取蛋白质样本时，如果操作环境中存在蛋白酶，或者样本保存温度不当，蛋白质就会被降解。核酸样本同样容易受到核酸酶的污染，在室温下放置时间过长也会导致降解。降解后的样本可能会失去原本的特性，无法在电泳中正常迁移，看似样本丢失。
2. 解决方法：在样本处理过程中，严格控制操作环境，避免引入蛋白酶或核酸酶。对于蛋白质样本，添加蛋白酶抑制剂，并在低温环境下操作和保存。对于核酸样本，使用无核酸酶的试剂和容器，添加核酸酶抑制剂，尽量在低温下保存和操作。如果发现样本已经降解，应重新制备样本。

三、上样操作问题

1. 原因：上样量不准确是导致样本丢失的常见原因之一。如果移液器的量程选择不当，或者移液器的精度出现问题，会导致吸取的样本量不足。例如，使用量程过大的移液器吸取微量样本，可能会因为移液器的误差而导致实际吸取的样本量远低于预期。此外，在吸取样本时，如果移液器的枪头没有完全插入样本溶液中，或者吸取过程中产生气泡，也会导致上样量不准确。
2. 解决方法：根据样本的体积和浓度，选择合适量程的移液器，并定期校准移液器，确保其精度。在吸取样本时，将移液器的枪头垂直插入样本溶液底部，缓慢匀速地吸取样本，避免产生气泡。同时，在吸取样本后，检查枪头内是否有残留的样本，确保样本完全转移到凝胶孔中。

四、上样位置错误

1. 原因：上样时，如果没有将样本准确地加到凝胶孔中，而是加到了凝胶孔周围或者其他位置，会导致样本无法在电场作用下正常迁移，出现样本丢失的假象。例如，在插入移液器枪头时，没有对准凝胶孔，或者枪头在凝胶孔上方晃动，使样本滴落在凝胶表面而不是孔内。
2. 解决方法：在插入移液器枪头时，将枪头垂直缓慢地插入凝胶孔中，确保枪头完全进入凝胶孔底部，然后缓慢推动移液器推杆，将样本注入凝胶孔。注入完成后，缓慢取出枪头，避免带出样本。同时，在每次上样前，仔细观察凝胶孔的位置和状态，确保上样位置准确。

五、电泳设备问题

1. 原因：凝胶在制备过程中，如果出现聚合不完全、凝胶孔堵塞等问题，会影响样本的进入和迁移。聚合不完全的凝胶结构不稳定，样本可能无法在其中正常迁移，甚至会从凝胶中渗出。凝胶孔堵塞可能是由于凝胶溶液中存在杂质，或者在插入梳子时破坏了凝胶孔结构。例如，在制备聚丙烯酰胺凝胶时，若丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺没有充分溶解，形成的凝胶中可能会有颗粒，导致凝胶孔堵塞。
2. 解决方法：在制备凝胶时，确保各试剂充分溶解和混合，准确控制引发剂的用量，使凝胶充分聚合。在插入梳子时，动作要轻柔，避免破坏凝胶孔结构。如果发现凝胶存在问题，应重新制备凝胶。

六、电极与缓冲液问题

1. 原因：电极与缓冲液的问题也可能导致样本丢失。如果电极表面被腐蚀或污染，会影响电流的传导，使样本无法在电场作用下正常迁移。缓冲液的pH值、离子强度等不合适，也会影响样本的电荷状态和迁移速度。例如，缓冲液的pH值偏离样本的等电点，会使样本所带电荷量改变，影响其在凝胶中的迁移。
2. 解决方法：定期检查电极的表面状况，若有腐蚀或污染，用砂纸轻轻打磨，然后用蒸馏水冲洗干净。准确配制缓冲液，确保其pH值和离子强度符合实验要求。在每次实验前，检查缓冲液的质量和用量，确保缓冲液能够正常发挥作用。

七、环境因素问题

1. 原因：环境温度的波动会对样本和凝胶产生影响。在温度较高时，样本中的水分会蒸发，导致样本浓度升高，可能会发生沉淀。同时，高温会使凝胶的结构发生变化，影响样本的迁移。在温度较低时，样本的流动性会降低，可能会导致上样困难，并且低温也可能影响凝胶的聚合效果。
2. 解决方法：将电泳实验安排在温度相对稳定的环境中进行，使用空调或恒温设备将环境温度控制在20 - 25℃。在样本处理和上样过程中，尽量减少样本暴露在环境中的时间，避免温度波动对样本的影响。

八、静电干扰

1. 原因：在干燥的环境中，容易产生静电。静电可能会吸附样本，导致样本在转移过程中丢失。例如，在使用移液器吸取样本时，移液器表面可能会产生静电，吸附样本，使实际转移到凝胶孔中的样本量减少。
2. 解决方法：增加实验室的湿度，可以使用加湿器将湿度保持在40% - 60%。在操作过程中，使用防静电设备，如防静电手套、防静电垫等，减少静电的产生。同时，在转移样本时，尽量避免快速移动移液器等操作，减少静电的影响。

当DYCZ - 24B双垂直电泳仪上样后出现样本丢失的情况时，通过对样本处理与保存、上样操作、电泳设备以及环境因素等方面进行全面排查，找到问题的根源，并采取相应的解决措施，能够有效解决这一问题，确保实验的顺利进行。在实验过程中，注重每一个细节，严格把控实验条件，是避免样本丢失等问题的关键。

本文由北京六一生物编辑整理。

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