DYCZ - 24EN双垂直电泳仪样本上样后不迁移怎么办?

作者：六一生物发布时间：2025-02-10 09:19:21 点击：

在科研实验里，使用DYCZ - 24EN双垂直电泳仪时，样本上样后正常迁移是获得有效实验结果的基础。但有时会出现样本上样后不迁移的状况，这让实验人员十分苦恼。下面，我们就全面分析DYCZ - 24EN双垂直电泳仪这一问题产生的原因，并提供有效的解决措施。

一、样本浓度过高或过低

1. 原因：样本浓度过高，其黏度增大，会阻碍样本在凝胶中的迁移。就像高浓度的蛋白质样本，分子间相互作用强，难以在电场作用下顺利移动。而样本浓度过低，信号强度太弱，即便迁移也难以被检测到，可能会被误判为不迁移。例如在核酸电泳中，过低浓度的DNA样本，由于含量太少，在凝胶中迁移后条带不明显。
2. 解决方法：通过预实验确定合适的样本浓度。如果样本浓度过高，可进行适当稀释，稀释时使用与样本缓冲液成分一致的溶液，保证样本所处化学环境不变。若样本浓度过低，可采用浓缩手段，如使用超滤离心管对蛋白质样本进行浓缩。

二、样本变性或降解

1. 原因：样本在储存、处理过程中，可能因温度、pH值、酶等因素变性或降解。比如蛋白质样本在高温下可能发生变性，空间结构改变，电荷分布也随之变化，影响迁移。核酸样本若受到核酸酶污染，会发生降解，片段变小，影响迁移行为。
2. 解决方法：优化样本保存和处理条件。保存蛋白质样本时，加入蛋白酶抑制剂，并低温保存；处理核酸样本时，严格控制操作环境，避免核酸酶污染，可添加核酸酶抑制剂。若发现样本已变性或降解，重新制备样本。

三、凝胶浓度不合适

1. 原因：凝胶浓度与样本中生物大分子的大小不匹配。若凝胶浓度过高，孔径过小，大分子样本难以通过，导致不迁移。例如分离大分子量的蛋白质，使用了高浓度的聚丙烯酰胺凝胶，蛋白质无法进入凝胶孔隙。相反，凝胶浓度过低，孔径过大，样本迁移过快，可能还未观察到就已跑出凝胶。
2. 解决方法：根据样本中生物大分子的分子量范围，选择合适浓度的凝胶。对于蛋白质，可参考蛋白质分子量标准曲线选择凝胶浓度；对于核酸，根据核酸片段大小选择合适的琼脂糖凝胶浓度。

四、凝胶聚合异常

1. 原因：凝胶聚合过程中，温度、引发剂用量等因素会影响聚合效果。温度过低，聚合速度慢，可能聚合不完全；引发剂用量不足，也会使凝胶聚合不充分。未完全聚合的凝胶结构疏松，无法为样本迁移提供稳定的支撑，阻碍样本迁移。
2. 解决方法：将凝胶制备过程控制在适宜温度，一般20 - 25℃。准确称量引发剂用量，加入引发剂后迅速、均匀混合，尽快灌胶。聚合过程中，避免震动和温度波动，确保凝胶充分、均匀聚合。

五、电压设置不当

1. 原因：电压是驱动样本迁移的动力。电压过低，电场力不足以推动样本在凝胶中移动，导致样本不迁移。例如在蛋白质SDS - PAGE电泳中，电压设置过低，蛋白质在凝胶中几乎不移动。而电压过高，可能使样本迁移过快，产生条带扭曲、模糊，甚至跑出凝胶。
2. 解决方法：通过预实验确定合适的电压。开始时设置较低电压进行预电泳，使样本在凝胶中初步定位，再逐渐升高电压至合适值。同时，参考仪器说明书和相关文献，根据样本和凝胶类型确定电压范围。

六、电泳缓冲液问题

1. 原因：缓冲液的pH值、离子强度等对样本迁移有重要影响。pH值不合适，会改变生物大分子的电荷状态，影响迁移。例如在蛋白质电泳中，pH值偏离蛋白质的等电点，蛋白质所带电荷量改变，迁移速度和方向也会改变。离子强度异常，会影响缓冲液的导电性，进而影响样本迁移。
2. 解决方法：准确配制缓冲液，确保pH值和离子强度正确。使用前，检查缓冲液是否变质、污染，若有问题，重新配制。同时，注意缓冲液的储存条件，避免pH值和离子强度发生变化。

七、设备故障问题

1. 原因：电极表面被腐蚀、污染，或者电极与电泳仪连接松动，会导致电流传导不畅。例如电极表面的金属被氧化，形成导电性差的氧化膜，阻碍电流通过，使样本无法在电场作用下迁移。
2. 解决方法：定期检查电极，若表面有腐蚀、污染，用砂纸轻轻打磨，再用蒸馏水冲洗干净。检查电极与电泳仪的连接是否牢固，如有松动，重新连接。若电极损坏严重，及时更换新电极。

八、电泳仪电源问题

1. 原因：电泳仪电源故障，如输出电压不稳定、无输出等，无法为电泳提供正常的电场，导致样本不迁移。电源内部的电子元件老化、损坏，可能造成电压异常。
2. 解决方法：使用万用表等工具检测电泳仪电源输出电压是否正常。若电源故障，联系专业维修人员进行维修或更换电源部件。在维修期间，可使用备用电泳仪继续实验，避免影响实验进度。

当DYCZ - 24EN双垂直电泳仪出现样本上样后不迁移的问题时，通过对样本、凝胶、电泳条件和设备等方面进行全面排查，找到问题根源并采取针对性措施，能有效解决这一问题，保证电泳实验顺利进行，为科研工作提供准确可靠的实验结果。在实验过程中，注重实验细节，严格把控各个环节，是避免此类问题发生的关键。

本文由北京六一生物编辑整理。

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