DYCZ - 24EN双垂直电泳仪制胶时凝胶不平整咋回事？

作者：六一生物发布时间：2025-02-10 09:16:44 点击：

在利用DYCZ - 24EN双垂直电泳仪开展实验时，一块平整的凝胶是保证电泳实验结果准确的基础。然而，不少实验人员在制胶过程中会遇到凝胶不平整的问题，这不仅会影响后续电泳时样本的迁移，还可能导致实验结果出现偏差。下面，我们就深入探讨一下导致DYCZ - 24EN双垂直电泳仪凝胶不平整的原因以及解决方法。

一、试剂混合不均匀

1. 原因：在配制凝胶溶液时，若各试剂没有充分混合，会导致局部浓度不一致。例如，在制备聚丙烯酰胺凝胶时，丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、缓冲液以及引发剂等成分如果搅拌不充分，就会出现部分区域凝胶浓度过高或过低的情况。浓度不均匀的凝胶在聚合过程中收缩程度不同，从而导致凝胶表面不平整。
2. 解决方法：在配制凝胶溶液时，使用磁力搅拌器充分搅拌，确保各成分完全溶解且均匀混合。搅拌时间可适当延长，一般在5 - 10分钟左右，期间观察溶液状态，直至无明显颗粒或沉淀。在加入引发剂后，迅速振荡或搅拌，使引发剂快速分散在溶液中，启动聚合反应。

二、试剂比例不准确

1. 原因：凝胶配方中各试剂的比例对凝胶的质量和形态有着重要影响。如果试剂比例出现偏差，如丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例失调，会改变凝胶的交联程度和孔径大小，进而影响凝胶的聚合和成型。交联度过高或过低都可能导致凝胶质地不均匀，表面不平整。
2. 解决方法：严格按照凝胶配方准确称量各试剂。使用高精度的天平或移液器，确保试剂用量的准确性。在每次配制前，仔细检查试剂的浓度和有效期，避免因试剂问题导致凝胶不平整。如果对配方的准确性存在疑虑，可以重新核对配方或参考权威文献。

三、灌胶速度不均匀

1. 原因：灌胶过程中，若灌胶速度时快时慢，会使凝胶溶液在模具中分布不均匀。快速灌胶时，溶液可能会产生较大的冲击力，导致局部堆积；而缓慢灌胶时，先灌入的部分可能已经开始聚合，造成凝胶厚度不一致。例如，在使用移液器灌胶时，手部的抖动或用力不均匀都可能导致灌胶速度不稳定。
2. 解决方法：在灌胶时，保持匀速缓慢的灌胶速度。可以使用带有刻度的移液器或专门的灌胶装置，控制灌胶的流速。同时，将移液器或灌胶装置垂直于模具，使凝胶溶液垂直流入模具底部，避免溶液冲击模具壁。在灌胶过程中，尽量保持手部稳定，减少抖动。

四、灌胶时混入气泡

1. 原因：灌胶时如果混入气泡，气泡在凝胶中会占据一定空间，导致凝胶在这些区域无法正常聚合，从而形成空洞或凹陷，使凝胶表面不平整。气泡可能是由于搅拌凝胶溶液时速度过快卷入空气，或者灌胶时移液器操作不当引入的。
2. 解决方法：在配制凝胶溶液后，可将溶液静置一段时间，让气泡自然上升到表面破裂。也可以使用超声处理的方法，将凝胶溶液放入超声清洗器中，超声2 - 3分钟，利用超声的高频振动使气泡破裂排出。在灌胶时，注意移液器的操作，避免快速吸取和注入溶液，防止引入新的气泡。如果发现凝胶溶液中有气泡，可使用细针或移液枪头轻轻将气泡挑出。

五、插入梳子操作不当

1. 原因：插入梳子时，如果角度不正确或用力不均匀，会破坏凝胶表面的平整度。例如，梳子倾斜插入，会使凝胶孔的深度和宽度不一致；用力过猛，可能会使凝胶表面出现划痕或凹陷。此外，插入梳子后如果晃动梳子，也会导致凝胶孔周围的凝胶结构受损，影响凝胶的平整度。
2. 解决方法：在插入梳子前，确保凝胶溶液已经稍微凝固但仍有一定流动性。将梳子垂直缓慢地插入凝胶中，插入深度要适中，避免过深或过浅。插入过程中，保持手部稳定，避免晃动梳子。插入后，不要随意移动梳子，等待凝胶完全聚合后，再小心地拔出梳子，注意不要破坏凝胶孔。

六、模具不干净

1. 原因：模具表面如果残留有上次制胶的凝胶碎片、杂质或其他污染物，会影响新凝胶的附着和成型。这些杂质会阻碍凝胶的均匀分布，导致凝胶在模具中凝固时出现不平整的情况。例如，模具上的凝胶碎片会使新凝胶在该区域无法紧密贴合，形成空隙或凸起。
2. 解决方法：每次制胶前，彻底清洁模具。使用清洁剂和软毛刷仔细刷洗模具表面，去除残留的凝胶和杂质。然后用蒸馏水冲洗干净，并用干净的毛巾或滤纸擦干。可以定期对模具进行浸泡清洁，将模具浸泡在适当的清洁剂溶液中一段时间，再进行刷洗，以确保模具的清洁度。

七、模具变形

1. 原因：长期使用或受到外力撞击，模具可能会发生变形。变形的模具无法为凝胶提供均匀的支撑和空间，导致凝胶在凝固过程中受到不均匀的压力，从而出现不平整的现象。例如，模具的边缘出现弯曲或凹陷，会使凝胶在这些部位的厚度不一致。
2. 解决方法：定期检查模具的形状和完整性。如果发现模具变形，应及时更换新的模具。在使用和存放模具时，要注意避免外力撞击，将模具放置在平整、稳定的地方，防止其变形。

八、温度变化

1. 原因：制胶过程中环境温度的波动会影响凝胶的聚合速度和质量。温度过高，凝胶聚合速度加快，可能导致局部聚合不均匀；温度过低，聚合速度减慢，甚至可能导致聚合不完全。例如，在夏季高温环境下，凝胶可能会在短时间内快速聚合，使得表面不平整；而在冬季低温环境中，凝胶聚合缓慢，容易受到其他因素的干扰。
2. 解决方法：将制胶过程控制在温度相对稳定的环境中，一般20 - 25℃较为适宜。可以使用空调或恒温箱来调节环境温度，避免温度波动。在凝胶聚合过程中，尽量减少环境温度的变化，确保凝胶能够均匀、充分地聚合。

九、震动干扰

1. 原因：在凝胶聚合过程中，如果受到外界震动干扰，会破坏凝胶的内部结构和均匀性。例如，制胶台附近有大型设备运行产生震动，或者实验人员在操作过程中不小心碰撞到制胶台，都可能使正在聚合的凝胶受到震动影响，导致表面不平整。
2. 解决方法：选择一个安静、稳定的制胶环境，避免在制胶台附近放置大型设备或进行其他可能产生震动的操作。在凝胶聚合过程中，尽量保持周围环境安静，避免碰撞制胶台。如果无法避免震动，可以使用减震垫等工具，减少震动对凝胶的影响。

当DYCZ - 24EN双垂直电泳仪制胶出现凝胶不平整的问题时，通过对凝胶配方、制胶操作、模具状况以及环境因素等方面进行全面排查和优化，能够有效解决这一问题，制备出平整的凝胶，为后续的电泳实验提供可靠的保障。在实验过程中，注重每一个细节，严格把控制胶环节，是获得准确实验结果的关键。

本文由北京六一生物编辑整理。

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