DYCZ - 25E垂直电泳仪上样后样本扩散严重的实用指南

作者：六一生物发布时间：2025-01-23 09:22:07 点击：

在利用DYCZ - 25E垂直电泳仪进行生物大分子分析实验时，上样后样本扩散严重是一个令人头疼的问题。这不仅会导致实验结果难以准确分析，还可能使实验失败，浪费宝贵的样本和时间。下面，我们将深入探讨这一问题出现的原因，并提供行之有效的处理办法。

一、样本浓度过低

1. 原因：当样本浓度过低时，样本分子在凝胶孔中分散程度较大，相互之间的作用力较弱。在电场作用下，样本分子更容易受到周围环境的影响，如缓冲液的流动、热运动等，从而导致样本扩散严重。例如，在进行蛋白质电泳时，如果蛋白质样本浓度过低，蛋白质分子在凝胶孔中分布稀疏，难以形成紧密的条带，容易向周围扩散。

2. 解决办法：通过浓缩样本提高样本浓度。可以采用离心超滤、沉淀等方法对样本进行浓缩处理。以离心超滤为例，选择合适截留分子量的超滤离心管，将样本加入其中，在一定转速下离心，使水分和小分子杂质透过超滤膜，而样本分子被截留并浓缩。在浓缩过程中，要注意操作条件的控制，避免样本损失或变性。同时，使用分光光度计或其他定量方法准确测定样本浓度，确保达到合适的上样浓度范围。

二、样本黏度不合适

1. 原因：样本黏度过低，流动性过大，在加入凝胶孔时难以控制，容易溢出并向周围扩散。而黏度过高，样本不易进入凝胶孔，可能导致上样不均匀，且在电场作用下，过高的黏度会阻碍样本分子的正常迁移，也可能引发样本扩散。例如，在核酸电泳中，若样本溶液中盐离子浓度过高，导致样本黏度过低，上样后核酸分子容易扩散。

2. 解决办法：调整样本黏度至合适范围。对于黏度过低的样本，可以加入适量的蔗糖、甘油等增稠剂，增加样本的黏度。一般来说，加入5% - 10%的蔗糖或甘油溶液较为合适。对于黏度过高的样本，可适当稀释样本，或者加入适量的去垢剂（如SDS）降低样本黏度，但要注意去垢剂的加入可能会影响样本的性质，需通过预实验确定合适的添加量。

三、上样量过大

1. 原因：上样量过大，样本在凝胶孔中过于拥挤，无法形成整齐的条带。多余的样本会溢出凝胶孔，向周围扩散，导致条带变形、模糊。例如，在蛋白质SDS - PAGE电泳中，如果上样量超过凝胶孔的承载能力，蛋白质就会从凝胶孔两侧挤出，在电泳过程中扩散开来。

2. 解决办法：通过预实验确定合适的上样量。设置不同的上样量梯度，如1μL、2μL、3μL等，观察条带的分离效果和扩散情况。根据样本的浓度、性质以及凝胶的类型，选择既能保证条带清晰可见，又不会导致样本扩散的最佳上样量。在实际操作中，使用高精度的移液器准确吸取样本，避免上样量出现偏差。

四、上样速度和方式不当

1. 原因：上样速度过快，样本溶液会快速冲击凝胶孔底部，容易产生气泡，且可能使样本在凝胶孔中分布不均匀，导致样本扩散。另外，上样方式不正确，如移液器枪头插入凝胶孔过深或过浅，都可能影响样本的正常进入和分布。例如，枪头插入过深，可能会破坏凝胶结构，使样本向周围扩散；插入过浅，样本可能无法完全进入凝胶孔。

2. 解决办法：控制合适的上样速度，一般建议缓慢匀速地将样本注入凝胶孔，每秒注入0.1 - 0.2μL较为合适。在上样前，将移液器枪头垂直缓慢插入凝胶孔中，插入深度以刚刚接触到凝胶孔底部为宜，然后缓慢推动移液器推杆，将样本注入凝胶孔。注入完成后，缓慢取出枪头，避免带出样本或产生气泡。同时，在每次上样前，检查移液器的性能，确保其正常工作。

五、电泳起始电压过高

1. 原因：在电泳开始时，如果电压过高，样本分子会在短时间内受到较大的电场力作用，快速向阳极或阴极迁移。由于样本分子在凝胶孔中的初始分布并不完全均匀，过高的电压会加剧这种不均匀性，导致样本扩散严重。例如，在开始蛋白质电泳时，若直接将电压设置为较高值，蛋白质分子会迅速冲出凝胶孔，向周围扩散。

2. 解决办法：采用低电压预电泳的方式。在电泳开始时，将电压设置为较低值，如20 - 50V，让样本在较小的电场力作用下缓慢进入凝胶，并在凝胶中初步定位。预电泳时间一般控制在5 - 10分钟，然后逐渐提高电压至正常电泳所需的电压值，使样本在稳定的电场中进行分离。这样可以使样本在凝胶中均匀分布，减少扩散现象。

六、电泳过程中温度过高

1. 原因：电泳过程中产生的热量会使凝胶温度升高，而温度升高会导致凝胶的黏度降低，样本分子的热运动加剧。在这种情况下，样本分子更容易在凝胶中扩散，影响条带的清晰度和分离效果。例如，在长时间的核酸电泳中，如果散热不佳，凝胶温度升高，核酸分子会因热运动而扩散。

2. 解决办法：控制电泳过程中的温度。使用带有冷却装置的电泳槽，如循环水冷式电泳槽，将电泳温度控制在15 - 25℃之间。在电泳过程中，密切关注温度变化，确保温度稳定。如果没有冷却装置，可以将电泳槽放置在低温环境中，如冰箱冷藏室或带有制冷功能的恒温箱中，但要注意避免冷凝水对电泳仪造成损坏。

当DYCZ - 25E垂直电泳仪上样后出现样本扩散严重的问题时，通过对样本处理、上样操作以及电泳条件等方面进行全面排查和优化，能够有效解决这一问题，确保电泳实验的顺利进行，为生物大分子的分析提供准确可靠的实验结果。在科研实验中，注重每一个细节，严格把控实验条件，是取得理想实验成果的关键。

本文由北京六一生物编辑整理。

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