DYCZ - 28B/D双板夹芯式垂直电泳仪凝胶不凝固原因及对策

作者：六一生物发布时间：2025-01-17 09:26:46 点击：

在运用DYCZ - 28B/D双板夹芯式垂直电泳仪开展实验时，凝胶的良好凝固是后续实验顺利进行的关键基础。然而，若凝胶出现不凝固的状况，整个实验进程将受阻，结果的准确性也会大打折扣。接下来，我们深入探讨DYCZ - 28B/D双板夹芯式垂直电泳仪凝胶不凝固的常见原因，并提供相应的解决对策。

一、试剂过期或变质

1. 原因：制备凝胶所用到的诸多试剂，如丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、过硫酸铵（APS）以及四甲基乙二胺（TEMED）等，均有严格的保质期限制。一旦试剂过期，其化学性质会发生改变，活性降低，无法有效引发凝胶的聚合反应。例如，过硫酸铵过期后，产生自由基的能力减弱，而自由基是促使丙烯酰胺单体聚合形成凝胶的核心要素。另外，试剂在储存过程中若保存不当，如受潮、受热等，也可能导致变质，影响凝胶的凝固。

2. 解决办法：养成定期检查试剂保质期的习惯，对于临近过期或已过期的试剂，果断予以更换。在购买试剂时，选择资质良好、信誉度高的供应商，确保试剂质量可靠。每启用一批新试剂，先进行小规模的凝胶制备预实验，观察凝胶的凝固情况，确认试剂正常后再用于正式实验。

二、试剂配比错误

1. 原因：凝胶的凝固高度依赖于各种试剂精确的配比。若在配制凝胶溶液时，各试剂比例失调，会严重影响凝胶的交联与凝固。比如，丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例不当，会改变凝胶的交联程度，进而影响其凝固效果。丙烯酰胺比例过高，凝胶可能过硬且易碎；比例过低，则凝胶可能太软，无法形成有效的分子筛结构。此外，过硫酸铵和TEMED的用量不准确，同样会干扰凝胶的凝固速度与质量。过硫酸铵用量不足，产生的自由基过少，凝胶凝固缓慢甚至不凝固；用量过多，则可能导致凝胶凝固过快，内部结构不均匀。

2. 解决办法：在配制凝胶溶液前，务必仔细研读实验方案和试剂说明书，严格按照要求准确称量和混合各种试剂。使用高精度的天平、移液器等仪器，确保试剂配比的精准度。针对常用的凝胶配方，制定详细、规范的操作指南，每次配制时严格遵循指南操作，减少人为误差。完成试剂混合后，仔细检查溶液的状态，确保其均匀一致。

三、温度不适宜

1. 原因：温度对凝胶的凝固过程起着关键作用。温度过低时，凝胶的聚合反应速度显著减慢，甚至可能完全停止。这是因为低温会降低过硫酸铵产生自由基的速率，以及丙烯酰胺单体的聚合活性。相反，温度过高虽然可能加速凝胶的凝固，但同时可能引发一系列问题，如凝胶内部产生气泡，影响其均一性，并且过高的温度可能导致某些试剂分解，同样不利于凝胶的正常凝固。

2. 解决办法：将凝胶制备过程控制在适宜的温度范围内，一般20 - 25℃较为理想。若实验室温度较低，可利用加热设备，如加热板或恒温水浴锅，将试剂和凝胶溶液预热至合适温度后再进行配制。若温度过高，则可通过空调等设备调节实验室温度，或在通风良好的环境中操作。在凝胶凝固过程中，尽量保持环境温度稳定，避免温度波动对凝胶凝固产生不利影响。

四、湿度影响

1. 原因：高湿度环境可能对凝胶的凝固产生负面影响。当环境湿度较大时，凝胶溶液容易吸收过多水分，导致其浓度发生变化，影响凝胶的凝固。过多的水分会稀释试剂的浓度，使引发聚合反应的有效成分相对减少，从而阻碍凝胶的正常凝固。此外，湿度较大时，空气中的水分可能在凝胶表面凝结，影响凝胶表面的凝固效果，导致凝胶表面不平整。

2. 解决办法：在湿度较高的环境中，可使用除湿设备，如除湿机，将实验室的湿度控制在相对较低且稳定的水平，一般建议湿度控制在40% - 60%。在制备凝胶时，尽量缩短凝胶溶液暴露在空气中的时间，避免过多吸收水分。同时，确保凝胶制备区域通风良好，有助于水分的挥发。

五、混合不均匀

1. 原因：在制备凝胶溶液时，若各种试剂未能充分混合均匀，会导致局部试剂浓度过高或过低，进而影响凝胶的聚合反应。例如，过硫酸铵和TEMED若未均匀分散在溶液中，可能会使凝胶部分区域凝固过快，而部分区域凝固缓慢甚至不凝固，最终得到的凝胶结构不均匀，无法满足实验要求。

2. 解决办法：在加入各种试剂后，使用磁力搅拌器或移液器反复吹打等方式充分搅拌溶液，确保所有试剂均匀混合。搅拌时间要足够，一般建议搅拌3 - 5分钟，同时观察溶液的状态，确保溶液呈现均匀一致的状态。在使用移液器吹打时，要注意吹打力度适中，避免产生过多气泡。

六、操作时间过长

1. 原因：从加入引发剂（如过硫酸铵和TEMED）到开始灌胶的时间间隔过长，可能会导致部分试剂提前发生反应，消耗了引发聚合反应的有效成分。当灌胶时，剩余的有效成分不足，使得凝胶无法正常凝固。另外，长时间暴露在空气中，凝胶溶液中的水分会挥发，导致试剂浓度改变，同样影响凝胶的凝固。

2. 解决办法：在加入引发剂后，尽快完成灌胶操作。一般建议在1 - 2分钟内完成灌胶，以保证引发剂在有效时间内发挥作用。同时，在等待灌胶的过程中，可将凝胶溶液暂时覆盖，减少水分挥发。

当DYCZ - 28B/D双板夹芯式垂直电泳仪出现凝胶不凝固的问题时，不要慌张。通过对试剂、环境和操作等方面进行系统、全面的排查和优化，通常能够找到问题所在并加以解决。在日常实验中，养成良好的实验习惯，严格把控各个环节，有助于确保凝胶的正常凝固，为实验的成功奠定坚实基础。

本文由北京六一生物编辑整理。

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