如何正确使用DYCZ - 28A单板夹芯式垂直电泳仪？

作者：六一生物发布时间：2024-09-20 09:01:29 点击：

在生物化学和分子生物学的实验领域，DYCZ - 28A单板夹芯式垂直电泳仪是一种常用的重要实验设备。正确使用该电泳仪对于获得准确可靠的实验结果至关重要。以下将详细介绍DYCZ - 28A单板夹芯式垂直电泳仪的正确使用方法。

一、实验前的准备工作

1. 设备检查

- 从存放处取出DYCZ - 28A单板夹芯式垂直电泳仪后，首先要对设备进行全面检查。仔细查看电泳槽的主体部分，检查是否有裂缝、变形或者其他损坏情况。哪怕是微小的破损都可能导致缓冲液泄漏，从而影响整个电泳过程。
- 接着检查电极，查看电极表面是否有生锈、腐蚀或者脏污的现象。生锈或腐蚀的电极可能会影响电流的传导效率，而脏污可能会干扰电泳过程中的电场分布。如果发现电极有问题，应及时清洁或更换。
- 还要检查玻璃板，玻璃板必须平整、光滑且无划痕。任何瑕疵都可能影响凝胶的形成和电泳效果。例如，划痕可能会导致凝胶在该部位不均匀，进而影响样本的迁移。

2. 材料准备

- 根据实验目的选择合适的凝胶类型。如果是进行蛋白质电泳，聚丙烯酰胺凝胶是常用的选择；若为核酸电泳，则通常采用琼脂糖凝胶。
- 准备相应的缓冲液。对于聚丙烯酰胺凝胶电泳，可能会用到Tris - 甘氨酸缓冲液；而核酸电泳常使用TAE（Tris - 乙酸 - EDTA）或TBE（Tris - 硼酸 - EDTA）缓冲液。在配制缓冲液时，务必使用去离子水，并严格按照配方准确称量试剂，确保缓冲液的浓度准确无误。
- 处理实验样本。对于蛋白质样本，可能需要进行提取、纯化、变性等操作；核酸样本则需要进行提取、定量等预处理，以确保样本处于适合电泳的状态。

二、玻璃板的安装与处理

1. 清洗玻璃板

- 将玻璃板从电泳仪中取出，用温和的洗涤剂和温水清洗。这一步可以有效去除玻璃板表面的油污、灰尘等杂质。清洗过程中要使用软布或海绵轻轻擦拭，避免刮伤玻璃板。
- 用大量清水彻底冲洗玻璃板，确保洗涤剂完全被冲掉。残留的洗涤剂可能会影响凝胶与玻璃板的结合或者干扰电泳过程。
- 最后，用无水乙醇擦拭玻璃板，使其表面干燥、洁净。这样可以进一步去除水分和杂质，为凝胶的制备创造良好的条件。

2. 安装玻璃板

- 将一块玻璃板平放在干净的实验台上，在其边缘放置配套的密封胶条或塑料夹条。胶条要与玻璃板紧密贴合，确保没有缝隙，这对于防止缓冲液泄漏和保证凝胶的形状至关重要。
- 然后将另一块玻璃板覆盖在上面，形成夹心结构。在安装过程中，要特别注意避免玻璃板之间产生气泡。如果有气泡，可以轻轻按压玻璃板或者使用塑料刮刀将气泡赶出。

三、灌胶操作

1. 凝胶溶液的制备

- 若选择聚丙烯酰胺凝胶，根据目标蛋白质的分子量大小确定合适的凝胶浓度。按照配方准确称量丙烯酰胺、双丙烯酰胺、Tris等试剂，加入适量的去离子水搅拌均匀。之后加入催化剂（如过硫酸铵）和加速剂（如TEMED），在加入后要迅速搅拌，但要注意避免产生过多气泡。
- 对于琼脂糖凝胶，依据核酸片段的大小确定琼脂糖的浓度。称取适量的琼脂糖粉末加入到一定体积的电泳缓冲液中，在微波炉或加热板上加热溶解，期间要不断搅拌，确保琼脂糖完全溶解。

2. 灌胶

- 将制备好的凝胶溶液缓慢倒入安装好的玻璃板之间的空隙中。灌胶时要从一侧开始，让凝胶溶液自然流淌，这样能确保凝胶均匀分布，减少气泡的产生。对于聚丙烯酰胺凝胶，灌胶至距离玻璃板顶部约1 - 2厘米处停止；琼脂糖凝胶则灌至足以覆盖电泳梳子的齿即可。

四、梳子的插入与凝胶凝固

1. 插入梳子

- 在凝胶溶液尚未完全凝固之前（对于聚丙烯酰胺凝胶，通常在灌胶后几分钟内；琼脂糖凝胶在溶液温度降至合适温度时），将梳子轻轻插入凝胶溶液中。梳子的齿要垂直向下，并且要确保梳子插入的深度一致，这样才能在凝胶中形成整齐的加样孔。

2. 凝胶凝固

- 让凝胶在室温下自然凝固。聚丙烯酰胺凝胶凝固所需时间较长，一般为30 - 60分钟；琼脂糖凝胶凝固速度相对较快，通常15 - 30分钟即可完全凝固。

五、样本准备与加样

1. 样本处理

- 蛋白质样本如果经过变性处理，要确保变性完全且浓度合适。可采用Bradford法或BCA法等对蛋白质样本进行定量，然后调整样本的浓度使其在合适的范围内。
- 核酸样本要确保纯度和浓度符合要求。可以通过分光光度计等仪器对核酸进行定量和纯度检测，必要时进行稀释或浓缩处理。

2. 加样

- 当凝胶完全凝固后，小心地拔出梳子，此时在凝胶中会留下加样孔。
- 使用微量移液器吸取适量的样本，缓慢地将样本注入加样孔中。要注意加样的体积不能超过加样孔的容量，同时要避免样本溢出到相邻的加样孔中。

六、电泳过程

1. 电极连接

- 将电泳槽的电极与电源正确连接。一般而言，红色电极连接电源的正极，黑色电极连接负极。在连接过程中，要确保电极连接牢固，没有松动或接触不良的现象，否则可能会影响电泳过程中的电流稳定性。

2. 设置电泳参数

- 根据样本的类型和实验目的设置合适的电泳电压和时间。例如，对于蛋白质的SDS - PAGE电泳，电压通常设置在80 - 120V，电泳时间1 - 3小时；对于核酸的琼脂糖凝胶电泳，电压可设置在100 - 150V，电泳时间30 - 60分钟。

3. 开始电泳

- 打开电源开关，启动电泳过程。在电泳期间，要密切关注电泳槽内的情况，如电流是否稳定、凝胶是否有异常发热等现象。如果发现电流突然增大或减小、凝胶过热等问题，应立即停止电泳，检查原因并进行调整。

七、实验结束后的处理

1. 关闭电源

- 当电泳达到预定的时间后，首先关闭电源开关，然后再拔掉电极插头，以确保安全。

2. 取出凝胶

- 小心地将玻璃板从电泳槽中取出，使用专用的工具将玻璃板分开，然后取出凝胶。

3. 后续分析

- 根据实验的目的对凝胶进行染色、显色等处理，以观察电泳的结果。对于蛋白质凝胶，可以采用考马斯亮蓝染色或银染等方法；对于核酸凝胶，可以使用溴化乙锭（EB）或其他安全的核酸染料进行染色，然后在凝胶成像系统中观察和分析电泳条带。

八、注意事项

1. 安全问题

- 在操作电泳仪的过程中，要避免接触电极和电泳液，防止触电事故的发生。
- 由于电泳过程中可能会产生热量，所以要避免触摸电泳槽，以免被烫伤。

2. 实验环境

- 保持实验环境的清洁和稳定。灰尘、杂质等可能会影响实验结果，因此要尽量减少环境中的灰尘和杂质。
- 要对实验环境的温度和湿度进行适当的控制，避免温度过高或者过低、湿度过大或者过小对实验产生不良影响，尤其是在凝胶的制备和凝固过程中。

3. 操作规范

- 严格按照操作步骤进行操作，不要随意更改实验条件和操作流程，否则可能会导致电泳结果不准确。
- 在灌胶、加样等操作中，要尽量避免产生气泡，因为气泡可能会影响样本的迁移和最终的实验结果。

正确使用DYCZ - 28A单板夹芯式垂直电泳仪需要仔细遵循上述的各个步骤和注意事项。只有这样，才能确保在电泳实验中获得准确、可靠的结果，为科研和实验工作提供有力的支持。

本文由北京六一生物编辑整理。

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