掌握DYCZ-28A单板夹芯式垂直电泳仪的使用方法

作者：六一生物发布时间：2024-09-20 08:51:44 点击：

在生物科学研究和实验中，电泳技术是一项不可或缺的工具，而DYCZ - 28A单板夹芯式垂直电泳仪凭借其高效、稳定的性能被广泛应用。下面就详细为大家介绍如何掌握DYCZ-28A单板夹芯式垂直电泳仪的使用方法。

一、了解电泳仪的基本结构

在开始使用DYCZ - 28A单板夹芯式垂直电泳仪之前，首先要熟悉它的基本结构。该电泳仪主要由电泳槽、电极、玻璃板、梳子等部件组成。电泳槽是整个电泳过程的容器，负责容纳缓冲液和支撑电泳系统；电极则提供电场，促使带电分子在凝胶中迁移；玻璃板用于形成凝胶的模具，而梳子的作用是在凝胶中制造加样孔。

二、实验前的准备工作

1. 设备检查

- 从存放处取出电泳仪后，仔细检查电泳槽是否有损坏，如槽体是否有裂缝或者变形的情况。若存在这些问题，可能会导致缓冲液泄漏，影响实验的顺利进行。
- 查看电极的状况，确保电极表面没有生锈或者腐蚀的痕迹。因为电极的良好状态对于电流的传导至关重要，如果电极出现问题，可能会导致电泳结果不准确。
- 对玻璃板进行细致的检查，玻璃板应该是平整、光滑的，没有划痕或者污渍。任何瑕疵都可能干扰凝胶的形成过程，进而影响电泳效果。

2. 缓冲液和凝胶材料的准备

- 根据实验的具体需求选择合适的缓冲液。如果是进行蛋白质电泳，Tris - 甘氨酸缓冲液是常见的选择；若是核酸电泳，TAE（Tris - 乙酸 - EDTA）或TBE（Tris - 硼酸 - EDTA）缓冲液较为常用。在准备缓冲液时，务必按照精确的配方进行配制，使用去离子水以避免杂质离子对电泳的干扰。
- 对于凝胶材料，如果是进行蛋白质分离，可能会用到聚丙烯酰胺凝胶；而核酸分离则多使用琼脂糖凝胶。按照实验要求准确称量所需的试剂，并且确保试剂的纯度符合标准。

三、玻璃板的安装与处理

1. 清洗玻璃板

- 将玻璃板从电泳仪中取下，用温和的洗涤剂和温水进行清洗。这一步是为了去除玻璃板表面可能存在的油污、灰尘等杂质，这些杂质会影响凝胶与玻璃板的贴合以及电泳过程。
- 用大量清水冲洗玻璃板，确保洗涤剂完全被冲洗掉，然后用无水乙醇擦拭玻璃板，使其表面干燥、洁净，这样有助于凝胶在玻璃板之间均匀地形成。

2. 安装玻璃板

- 把一块玻璃板平放在干净的实验台上，在其边缘放置配套的密封胶条或者塑料夹条，要保证胶条与玻璃板紧密贴合，没有缝隙。
- 接着，将另一块玻璃板覆盖在上面，形成一个夹心结构。在这个过程中，要注意检查玻璃板之间是否有气泡产生。如果有气泡，可以轻轻按压玻璃板或者使用塑料刮刀将气泡赶出，因为气泡会影响凝胶的质量。

四、灌胶操作

1. 凝胶溶液的制备

- 若选择聚丙烯酰胺凝胶，根据需要分离的蛋白质分子量大小确定合适的凝胶浓度。按照配方准确称量丙烯酰胺、双丙烯酰胺、Tris等试剂，加入适量的去离子水，搅拌均匀。然后加入催化剂（如过硫酸铵）和加速剂（如TEMED），在加入后要迅速搅拌，但要避免产生过多的气泡。
- 对于琼脂糖凝胶，根据核酸片段的大小确定琼脂糖的浓度。称取适量的琼脂糖粉末，加入到一定体积的电泳缓冲液中，在微波炉或加热板上加热溶解，期间要不断搅拌，确保琼脂糖完全溶解。

2. 灌胶

- 将制备好的凝胶溶液缓慢倒入已经安装好的玻璃板之间的空隙中。从一端开始，让凝胶溶液自然流淌，这样可以确保凝胶均匀地分布在玻璃板之间，避免产生气泡。灌胶的高度要合适，一般距离玻璃板顶部1 - 2厘米为宜。

五、梳子的插入与凝胶凝固

1. 插入梳子

- 在凝胶溶液还没有完全凝固之前（对于聚丙烯酰胺凝胶，通常在灌胶后的几分钟内；琼脂糖凝胶在溶液温度降低到合适温度时），将梳子轻轻插入凝胶溶液中。梳子的齿要垂直向下，并且要保证梳子插入的深度一致，这样才能在凝胶中形成整齐的加样孔。

2. 凝胶凝固

- 让凝胶在室温下自然凝固。聚丙烯酰胺凝胶凝固所需的时间较长，大概在30 - 60分钟；琼脂糖凝胶凝固速度相对较快，通常15 - 30分钟即可完全凝固。

六、样本准备与加样

1. 样本处理

- 对于蛋白质样本，如果是需要进行变性处理的实验，要确保变性完全。并且在加样之前，要对蛋白质样本进行定量，如采用Bradford法或者BCA法，然后调整样本的浓度到合适的范围。
- 核酸样本同样需要进行定量和纯度检测，例如使用分光光度计。根据检测结果，必要时对核酸样本进行稀释或者浓缩处理，以确保样本的质量符合电泳要求。

2. 加样

- 当凝胶完全凝固后，小心地拔出梳子，此时在凝胶中会留下加样孔。
- 使用微量移液器吸取适量的样本，缓慢地将样本注入加样孔中。要注意加样的体积不能超过加样孔的容量，并且要避免样本溢出到相邻的加样孔中。

七、电泳过程

1. 电极连接

- 将电泳槽的电极与电源正确连接。一般来说，红色电极连接电源的正极，黑色电极连接负极。在连接过程中，要确保电极连接牢固，避免出现松动或者接触不良的情况，否则可能会影响电泳过程中的电流稳定性。

2. 设置电泳参数

- 根据样本的类型和实验目的来设置合适的电泳电压和时间。例如，在进行蛋白质的SDS - PAGE电泳时，电压通常设置在80 - 120V之间，电泳时间为1 - 3小时；如果是核酸的琼脂糖凝胶电泳，电压可设置在100 - 150V之间，电泳时间为30 - 60分钟。

3. 开始电泳

- 打开电源开关，启动电泳过程。在电泳期间，要密切关注电泳槽内的情况，例如电流是否稳定、凝胶是否有异常发热等现象。如果发现电流突然增大或者减小、凝胶过热等问题，应该立即停止电泳，检查原因并进行调整。

八、实验结束后的处理

1. 关闭电源

- 当电泳达到预定的时间后，首先关闭电源开关，然后再拔掉电极插头，这样可以确保安全，防止触电事故的发生。

2. 取出凝胶

- 小心地将玻璃板从电泳槽中取出，使用专用的工具将玻璃板分开，然后取出凝胶。

3. 后续分析

- 根据实验的目的对凝胶进行染色、显色等处理，以便观察电泳的结果。对于蛋白质凝胶，可以采用考马斯亮蓝染色或者银染等方法；对于核酸凝胶，可以使用溴化乙锭（EB）或者其他安全的核酸染料进行染色，然后在凝胶成像系统中观察和分析电泳条带。

九、使用过程中的注意事项

1. 安全方面

- 在操作电泳仪的过程中，要特别注意安全，避免接触电极和电泳液，防止触电危险。
- 由于电泳过程中可能会产生热量，所以要避免触摸电泳槽，以免被烫伤。

2. 实验环境

- 保持实验环境的清洁和稳定。灰尘、杂质等可能会影响实验结果，因此要尽量减少环境中的灰尘和杂质。
- 要对实验环境的温度和湿度进行适当的控制，避免温度过高或者过低、湿度过大或者过小对实验产生不良影响，尤其是在凝胶的制备和凝固过程中。

3. 操作规范

- 在整个使用过程中，要严格按照操作步骤进行操作，不要随意更改实验条件和操作流程，否则可能会导致电泳结果不准确。
- 在灌胶、加样等操作中，要尽量避免产生气泡，因为气泡可能会影响样本的迁移和最终的实验结果。

掌握DYCZ-28A单板夹芯式垂直电泳仪的使用方法需要耐心和细心，通过不断地实践和积累经验，才能熟练运用该仪器进行准确、高效的电泳实验。希望以上内容对大家有所帮助。

本文由北京六一生物编辑整理。

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