DYCZ-28B 型垂直电泳仪的使用全流程

作者：六一生物发布时间：2024-09-19 08:57:36 点击：

在现代生物化学与分子生物学的研究领域中，电泳技术是一项极为关键的实验手段。DYCZ - 28B 型垂直电泳仪作为一款常用的实验设备，其正确的使用流程对于实验结果的准确性至关重要。以下是DYCZ-28B 型垂直电泳仪的详细使用流程说明：

一、实验前的准备工作

1. 设备检查

- 从存储位置取出 DYCZ - 28B 型垂直电泳仪，仔细检查电泳槽的各个部件。查看电泳槽的主体是否有裂痕或者损坏，这可能导致缓冲液泄漏，影响实验的正常进行。
- 检查电极的状况，确保电极没有生锈或者腐蚀的迹象，因为这会影响电流的传导效率。
- 对玻璃板进行检查，玻璃板应平整、无划痕，且表面干净。任何瑕疵都可能在电泳过程中导致凝胶不均匀或者产生气泡。

2. 实验材料准备

- 根据实验的目的和样本的性质，选择合适的凝胶类型。例如，对于蛋白质的分离，聚丙烯酰胺凝胶是常用的选择；对于核酸的分离，则通常使用琼脂糖凝胶。
- 按照标准配方准备缓冲液。缓冲液的选择和浓度对于电泳的效果有着直接的影响。例如，在蛋白质电泳中常用的 Tris - 甘氨酸缓冲液，在核酸电泳中常用的 TAE 或 TBE 缓冲液。在准备缓冲液时，要确保使用去离子水，以减少杂质离子对实验的干扰。
- 处理实验样本，对蛋白质样本可能需要进行变性、还原等处理，对核酸样本可能需要进行提取、纯化等操作。

二、玻璃板的组装与处理

1. 组装玻璃板

- 将一块玻璃板平放在干净的实验台上，在其边缘放置配套的密封胶条或者塑料夹条。确保胶条与玻璃板紧密贴合，没有缝隙。
- 然后，将另一块玻璃板覆盖在上面，形成一个夹心结构。在组装过程中，要仔细检查玻璃板之间是否有气泡产生。如果有气泡，可以轻轻按压玻璃板或者使用塑料刮刀将气泡赶出。

2. 玻璃板的清洁

- 即使玻璃板看起来很干净，也需要进行清洁处理。用温和的洗涤剂和温水清洗玻璃板，去除可能存在的油污和灰尘。
- 用大量的清水冲洗玻璃板，确保洗涤剂完全被冲洗掉。
- 最后，用无水乙醇擦拭玻璃板，使玻璃板表面干燥且清洁，为灌胶做好准备。

三、灌胶操作

1. 凝胶溶液的制备

- 根据实验的需求，确定凝胶的浓度。对于不同分子量的蛋白质或者不同长度的核酸，需要选择不同浓度的凝胶。
- 准确称量所需的凝胶试剂，按照顺序将它们混合在一起。在混合过程中，要确保试剂完全溶解，并且避免产生气泡。
- 根据凝胶的类型，加入适量的催化剂和加速剂。例如，在制备聚丙烯酰胺凝胶时，需要加入过硫酸铵和 TEMED 作为催化剂和加速剂。

2. 灌胶

- 将制备好的凝胶溶液缓慢地倒入已经组装好的玻璃板之间的空隙中。从一端开始，让凝胶溶液自然流淌，以确保凝胶均匀分布。
- 当凝胶溶液灌至距离玻璃板顶部大约 1 - 2 厘米时，停止灌胶。

四、梳子的插入与凝胶凝固

1. 插入梳子

- 在凝胶溶液尚未完全凝固之前，将梳子轻轻插入凝胶溶液中。梳子的齿要垂直向下，并且要确保梳子插入的深度一致。梳子的作用是在凝胶中形成加样孔，用于后续的样本加样。

2. 凝胶凝固

- 将灌好胶并插入梳子的玻璃板放置在水平的实验台上，让凝胶在室温下自然凝固。根据凝胶的类型和浓度，凝固时间可能会有所不同。例如，聚丙烯酰胺凝胶通常需要 30 - 60 分钟才能完全凝固，而琼脂糖凝胶则需要 15 - 30 分钟左右。

五、样本准备与加样

1. 样本处理

- 根据实验的设计，对样本进行进一步的处理。例如，对蛋白质样本进行定量分析，调整样本的浓度和缓冲液成分；对核酸样本进行荧光标记或者酶切处理等。

2. 加样

- 当凝胶完全凝固后，小心地拔出梳子，此时在凝胶中会留下整齐的加样孔。
- 使用微量移液器，吸取适量的样本，缓慢地将样本加入到加样孔中。在加样过程中，要避免样本溢出到相邻的加样孔中，同时也要注意加样的体积不要超过加样孔的容量。

六、电泳过程

1. 连接电极

- 将电泳槽的电极与电源连接。通常，红色的电极连接电源的正极，黑色的电极连接负极。确保电极连接牢固，没有松动或者接触不良的情况。

2. 设置电泳参数

- 根据样本的特性和实验的要求，设置合适的电泳电压和电泳时间。例如，在蛋白质电泳中，通常设置电压为 80 - 120V，电泳时间为 1 - 3 小时；在核酸电泳中，可设置电压为 100 - 150V，电泳时间为 30 - 60 分钟。

3. 开始电泳

- 打开电源开关，开始电泳。在电泳过程中，要密切观察电泳槽内的情况，如电流是否稳定、凝胶是否发热等。如果发现异常情况，如电流突然增大或者减小、凝胶过热等，应立即停止电泳，检查原因并进行调整。

七、实验结束后的处理

1. 关闭电源

- 当电泳达到预定的时间后，先关闭电源开关，然后再拔掉电极插头，确保安全。

2. 取出凝胶

- 小心地将玻璃板从电泳槽中取出，用专用的工具将玻璃板分开，取出凝胶。

3. 后续分析

- 根据实验的目的，对凝胶进行染色、显色、拍照或者其他分析操作。例如，对蛋白质凝胶进行考马斯亮蓝染色或者银染，对核酸凝胶进行溴化乙锭染色等。

八、注意事项

1. 安全注意事项

- 在操作电泳仪的过程中，要避免直接接触电极和电泳液，防止触电事故的发生。
- 电泳过程中可能会产生热量，要注意避免烫伤。

2. 实验环境

- 保持实验环境的清洁和稳定，避免灰尘、杂质等对实验的干扰。
- 尽量保持温度和湿度的相对稳定，因为环境因素可能会影响凝胶的凝固和电泳的效果。

3. 操作规范

- 严格按照操作步骤进行操作，不要随意更改实验条件和操作流程。
- 在灌胶、加样等过程中，要尽量避免产生气泡，因为气泡可能会影响样本的迁移和实验结果。

DYCZ - 28B 型垂直电泳仪的使用流程虽然较为复杂，但只要严格按照上述步骤进行操作，并且注意各个环节的关键要点，就能够获得理想的实验结果，为科研工作提供有力的支持。

本文由北京六一生物编辑整理。

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