DYCZ-28B 型垂直电泳仪详细操作步骤全解析

作者：六一生物发布时间：2024-09-19 08:47:27 点击：

在生物实验的领域中，电泳技术是一种至关重要的分离和分析手段，而 DYCZ - 28B 型垂直电泳仪以其高效稳定的性能被广泛应用。下面就为大家详细介绍这款DYCZ - 28B 型垂直电泳仪的操作步骤，让你能在实验中得心应手。

一、前期准备工作

1. 设备检查

- 从储存位置取出 DYCZ - 28B 型垂直电泳仪，仔细检查电泳槽、电极、玻璃板、梳子等部件是否有损坏或者缺失的情况。任何有瑕疵的部件都可能影响后续实验的进行。
- 检查电源线是否完好，确保没有破损或者短路的风险。

2. 实验材料准备

- 根据实验目的选择合适的凝胶类型，如聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶。对于蛋白质的分离，聚丙烯酰胺凝胶通常是首选；对于核酸的分离，琼脂糖凝胶更为常用。
- 准备相应的缓冲液，常见的缓冲液有 Tris - 乙酸（TAE）、Tris - 硼酸（TBE）等。按照标准配方准确称量化学试剂，用去离子水溶解并定容，确保缓冲液的浓度准确无误。
- 收集并处理实验样本，例如对蛋白质样本进行提取、纯化、变性等操作，对核酸样本进行提取、酶切等处理。

二、玻璃板的清洗与安装

1. 清洗玻璃板

- 将玻璃板从电泳仪中取出，用温和的洗涤剂和温水清洗玻璃板表面的灰尘、油脂等杂质。可以使用软布或者海绵轻轻擦拭。
- 用大量的清水冲洗玻璃板，确保洗涤剂完全被冲洗掉。
- 最后，用无水乙醇擦拭玻璃板，使其表面干燥且清洁，这样可以避免在电泳过程中产生气泡或者影响凝胶的凝固。

2. 安装玻璃板

- 对于单板操作，先将一块玻璃板平放在干净的实验台上，将配套的橡胶条或塑料夹条沿着玻璃板的边缘放置，确保夹条与玻璃板紧密贴合。然后，将另一块玻璃板覆盖在上面，形成夹心结构。
- 对于双板操作，按照同样的方法分别组装好两块玻璃板夹心结构。在安装过程中，要注意避免玻璃板之间产生气泡，确保玻璃板之间的密封性。

三、灌胶过程

1. 凝胶溶液制备

- 根据实验需求确定凝胶的浓度。不同的样本和分离目的需要不同的凝胶浓度。例如，分离小分子蛋白质可能需要较高浓度的聚丙烯酰胺凝胶，而分离大片段核酸则需要较低浓度的琼脂糖凝胶。
- 将所需的凝胶试剂按照比例混合，在搅拌的同时加入适量的催化剂和加速剂，确保凝胶溶液混合均匀。

2. 灌胶

- 将制备好的凝胶溶液缓慢倒入已经安装好的玻璃板之间的空隙中。对于单板，从一端开始缓慢倾倒，让溶液自然流淌，确保没有气泡产生；对于双板，分别对两块玻璃板夹心结构进行灌胶操作。
- 当凝胶溶液灌至距离玻璃板顶部约 1 - 2 厘米时，停止灌胶。

四、梳子的插入与凝胶凝固

1. 插入梳子

- 在凝胶溶液尚未完全凝固之前（通常在灌胶后几分钟内），将梳子轻轻插入凝胶溶液中。梳子的齿要垂直向下，并且确保梳子插入的深度均匀一致。梳子的作用是在凝胶中形成加样孔。

2. 凝胶凝固

- 让凝胶在室温下自然凝固。凝固时间根据凝胶的类型和浓度而有所不同，一般聚丙烯酰胺凝胶需要 30 - 60 分钟，琼脂糖凝胶则需要 15 - 30 分钟左右。

五、样本准备与加样

1. 样本处理

- 根据实验设计对样本进行进一步处理，如对蛋白质样本进行定量、调整缓冲液成分等，对核酸样本进行荧光标记等操作。

2. 加样

- 当凝胶完全凝固后，小心地拔出梳子，此时在凝胶中会留下整齐的加样孔。
- 使用微量移液器，吸取适量的样本，缓慢地将样本加入到加样孔中。注意加样的体积要适中，不要超过加样孔的容量，同时要避免样本溢出到相邻的加样孔中。

六、电泳操作

1. 连接电极

- 将电泳槽的电极与电源连接，红色电极连接电源正极，黑色电极连接电源负极。确保连接牢固，没有松动或者接触不良的情况。

2. 设置参数

- 根据实验要求和样本特性，设置合适的电泳电压和电泳时间。例如，对于蛋白质的 SDS - PAGE 电泳，通常设置电压为 80 - 120V，电泳时间为 1 - 3 小时；对于核酸的琼脂糖凝胶电泳，可设置电压为 100 - 150V，电泳时间为 30 - 60 分钟。

3. 开始电泳

- 打开电源开关，开始电泳。在电泳过程中，注意观察电泳槽内的情况，确保电流稳定，没有异常现象，如电极冒泡异常、凝胶发热等。

七、实验结束后的处理

1. 关闭电源

- 当电泳达到预定的时间后，先关闭电源开关，然后再拔掉电极插头，确保安全。

2. 取出凝胶

- 小心地将玻璃板从电泳槽中取出，用专用的工具将玻璃板分开，取出凝胶。

3. 后续分析

- 根据实验目的对凝胶进行染色、显色、拍照或者其他分析操作，如对蛋白质凝胶进行考马斯亮蓝染色或银染，对核酸凝胶进行溴化乙锭染色等。

八、注意事项

1. 安全注意事项

- 在操作电泳仪的过程中，始终注意安全。避免直接接触电极和电泳液，防止触电事故的发生。
- 电泳过程中可能会产生热量，避免触摸电泳槽以免烫伤。

2. 实验环境

- 保持实验环境的清洁和稳定。避免灰尘、杂质等进入电泳槽，影响实验结果。同时，尽量保持温度和湿度的相对稳定。

3. 操作规范

- 严格按照操作步骤进行操作，不要随意更改实验条件和操作流程。
- 在灌胶、加样等过程中，要尽量避免产生气泡，以免影响实验结果。

DYCZ - 28B 型垂直电泳仪的操作虽然需要一定的细心和耐心，但只要按照上述详细的步骤进行操作，就能在实验中获得理想的分离效果，为你的科研工作提供可靠的实验数据。

本文由北京六一生物编辑整理。

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