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新手必知电泳仪的正确使用步骤
作者:六一生物
发布时间:2024-07-24 09:00:36
点击:
对于刚刚接触电泳实验的新手来说,掌握电泳仪的正确使用步骤是确保实验成功的关键。下面将为您详细介绍电泳仪的正确使用流程,帮助您顺利开展实验。
一、准备工作
在开始使用电泳仪之前,充分的准备工作必不可少。
首先,您需要熟悉实验的目的和要求,确定所需的电泳类型(如琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等)以及样品的性质和浓度。
然后,准备好所需的仪器和试剂,包括电泳仪、电泳槽、电源、凝胶、缓冲液、样品、移液器、染色剂等。同时,确保工作环境整洁、干燥,避免灰尘和杂质对实验的干扰。
二、安装电泳槽
将电泳槽的两个电极分别插入对应的插孔中,确保连接紧密且稳定。如果是可拆卸的电泳槽,按照说明书正确组装各个部件。
对于水平电泳槽,要将凝胶放置在槽内,并确保凝胶与电泳槽的边缘紧密贴合,没有缝隙。垂直电泳槽则需要将凝胶安装在夹板之间,并注意调整夹板的位置,使凝胶保持垂直状态。
三、配制缓冲液
根据实验的类型和要求,选择合适的缓冲液配方。按照配方准确称量所需的试剂,溶解在适量的蒸馏水中。
配制过程中要充分搅拌,使试剂完全溶解。调整缓冲液的 pH 值至规定范围,并用 pH 计进行测量和校准。
四、制备凝胶
如果使用琼脂糖凝胶,根据样品的大小和分离要求,确定琼脂糖的浓度。将琼脂糖粉末加入到已加热的缓冲液中,搅拌至完全溶解。
然后将溶液倒入模具中,插入梳子,待凝胶冷却凝固后拔出梳子,形成加样孔。
对于聚丙烯酰胺凝胶,需要按照一定的比例混合丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺溶液,并加入引发剂和催化剂,迅速灌胶,使其聚合凝固。
五、加样
使用移液器将处理好的样品缓慢加入到凝胶的加样孔中。加样时要注意避免产生气泡,且加样量不宜过多或过少。
通常,每个加样孔的加样量应控制在一定的体积范围内,以保证电泳效果。
六、连接电泳仪
将电泳槽与电泳仪的电源连接好,注意正负极的对应关系。确保连接牢固,避免接触不良导致电流不稳定。
七、设置电泳参数
根据实验的要求和样品的特性,设置合适的电泳参数,如电压、电流和电泳时间。
一般来说,起始电压不宜过高,以免造成样品的快速迁移和条带变形。随着电泳的进行,可以适当提高电压,但要密切观察电泳的情况,防止过热或其他异常现象。
电泳时间的确定需要根据凝胶的长度、浓度以及样品的迁移速度进行估算。可以通过预实验或者参考相关文献来初步确定电泳时间,然后在实际操作中根据条带的迁移情况进行调整。
八、启动电泳
确认所有设置无误后,启动电泳仪,开始电泳实验。
在电泳过程中,要定期观察凝胶中样品的迁移情况,如条带的清晰度、位置和形状等。如果发现异常,应及时停止电泳,检查原因并进行相应的调整。
九、结束电泳
当样品中的条带迁移到合适的位置时,停止电泳。关闭电源,小心取出电泳槽。
十、染色与观察
对电泳后的凝胶进行染色处理,以显示样品的条带。常用的染色剂有 EB(溴化乙锭)、考马斯亮蓝等。
染色完成后,使用凝胶成像系统或紫外透射仪对凝胶进行观察和拍照,记录实验结果。
十一、清洁与整理
实验结束后,及时清理电泳槽、电极和其他仪器设备,去除残留的凝胶和缓冲液。将仪器整理归位,妥善存放试剂和样品。
通过以上详细的步骤,新手可以逐步掌握电泳仪的正确使用方法。需要注意的是,在实际操作中要严格遵守实验室的安全规范,认真细致地进行每一个环节,多进行练习和总结经验,不断提高自己的实验技能。
本文由北京六一生物编辑整理。
北京六一生物科技有限公司创建于1970年,50多年的历史,公司先后3次承担电泳装置产品国家、行业标准的起草、修订工作,2009年负责《基础电泳装置》国家标准已发布实施。专业生产生物化学与分子生物学检验分析仪器的科技型国有企业。
主要生产包含电泳仪、紫外分析仪、凝胶成像分析系统、酶标仪、化学发光成像系统、基因扩增仪等检验分析设备。
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